Pozakomórkowa hodowla HCV
Filip Gołębiowski | 2005-02-18
Opracowany został pozakomórkowy system służący do hodowli i namnażania wirusa zapalenia wątroby typu C (HCV, ang. Hepatitis C Virus), główną przyczynę chorób wątroby na świecie. Twórcy wierzą, że opracowane – hodowla in vitro w komórkach ludzkiego raka wątroby - przez nich rozwiązanie pozwoli łatwiej badać cykl życiowy tego wirusa. Dotychczasowe prace były utrudnione ze względu ze względu na niedoskonałość metod hodowli wirusa, lub wcześniejszy ich brak.
HCV jest główną przyczyną chorób wątroby na świecie. Dużą przeszkodą w badaniu jego cyklu życiowego jest brak dobrego systemu hodowli w komórkach in vitro. Na chwilę obecną istnieje system pozwalający na hodowlę wirusa, jednak nie umożliwia on otrzymania wirionów.
W swojej pracy, która ukazała się 15 lutego w magazynie PNAS, Theo Heller ze współpracownikami, opisuje konstrukcję nowego systemu umożliwiającego hodowlę HCV, oraz otrzymanie wirionów – hodowli in vitro w komórkach ludzkiego raka wątroby.
W tworzeniu konstruktu wykorzystane zostało cDNA genomowe ze zdolnej do infekcji linii CG1b. Zostało ono umieszczone pomiędzy dwoma rybozymami generującymi końce 5* i 3* jakie występują u *dzikiej* formy wirusa. Jako kontrola posłużył im drugi fragment genomu wirusa, zawierający mutację w genie kodującym wirusową polimerazę RNA zależną od RNA (RdRp ang. RNA-dependent RNA polymerase). Tak otrzymane konstrukty ekspresyjne zostały użyte do transfekcji komórek Huh7 – komórek ludzkiego raka wątroby< (ang. Human hepatoma cell line). Naukowcom udało się uzyskać zarówno ekspresję białek wirusach jak i syntezę wirionów. Obecność białek strukturalnych i niestrukturalnych potwierdzili metodą immunofluorescencyjną i Western blot. Odrębnymi metodami dowiedli obecności wirusowego RNA i jego replikacji w komórkach. Poprzez wirowanie medium hodowlanego w gradiencie sacharozy otrzymali m.in. Frakcję o gęstości 1.16 g/ml, która to wartość jest zgodna z gęstością całych wirionów. Dodatkowo, po wykonaniu zdjęć mikroskopem elektronowym, zauważyli cząsteczki HCV.
Wirus ludzkiego zapalenia wątroby należy do Flaviviridae. Jego genom jest zbudowany z RNA o długości ok. 9.6 kb. Zawiera długą na około 3000 aminokwasów otwartą ramkę odczytu. Na końcu 3* i 5* znajdują się niekodujące fragmenty powtórzone (NCR, ang. NonCoding Repeats). Fragent NCR na końcu 5* zawiera sekwencję IRES (ang. Internal Ribosome Entry Site), która może służyć jako inicjator translacji łącząc się z rybosomem. Jest to szczególnie ważne w momencie, kiedy wirusowa proteaza zdeaktywuje czynnik translacyjny eIF-4G, bez którego nie może się rozpocząć translacja białka na rybosomie. W efekcie działania wirusa produkcja białek komórkowych jest ograniczona, podczas gdy białka wirusowe są syntetyzowane bez przeszkód.
Zakażenie HCV w większości przypadków prowadzi do ciężkiej choroby, która najczęściej przekształca się w chroniczne zapalenie wątroby. Prawie wszyscy zakażeni wytwarzają odpowiedź humoralną i komórkową, która jednak zazwyczaj nie usuwa wirusa i prowadzi do zniszczeń własnych komórek wątroby. Pacjenci z przewlekłym zapaleniem wątroby mają dużą szansę na zachorowanie na raka wątroby (HCC, ang. HepatoCellular Carcinoma).
Stworzony i opisany system powiększa zbiór narzędzi, którymi dysponują naukowcy, służących do badania wirusa zapalenia wątroby typu C.
Dodatkowe informacje:
NCBI
Informacje na temat HCV oraz wywoływanej przez niego choroby
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/bv.fcgi?rid=mmed.section.3755
Źródła:
PNAS
An in vitro model of hepatitis C virion production
Theo Heller, Satoru Saito, Jonathan Auerbach, Tarice Williams, Tzivia Rachel Moreen, Allison Jazwinski, Brian Cruz, Neha Jeurkar, Ronda Sapp, Guangxiang Luo, and T. Jake Liang
PNAS 2005 102: 2579-2583; published online before print February 8 2005
Microbiology (c) Leicester
http://www-micro.msb.le.ac.uk/3035/HCV.html
Komentarze
hcv | 2006-02-01 00:00:00
moja kolezanka jest chora na HCV i nie chce sie podac leczeni jak ja mam jej pomuc jesli ktos wie to prosze napisz do mnie moje gg to 7873974
Aska | 2006-06-18 00:00:00
Jestem nosicielem hcv.Wiem o tym od 3 m-cy.Jestem po biopsji.Nie ukrywam ,że posiadam bardzo mało informacji na ten temat.Mam nadzieję,że wszystko będzie dobrze,chociaż bardzo boję się tego co będzie dalej!!
Zbigniew | 2008-08-08 21:52:36
Dodatkowe informacje pisane w jez. angielskim. Szkoda , że nie przetłumaczono na jez. polski. Nie każdy zna j.ang.